中低壓液相色譜柱系統由儲液器、泵、進樣器、色譜柱、檢測器、記錄儀等幾部分組成。儲液器中的流動相被高壓泵打入系統,樣品溶液經進樣器進入流動相,被流動相載入中低壓液相色譜柱內,由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數,在兩相中作相對運動時,經過反復多次的吸附-解吸的分配過程,各組分在移動速度上產生較大的差別,被分離成單個組分依次從柱內流出,通過檢測器時,樣品濃度被轉換成電信號傳送到記錄儀,數據以圖譜形式打印出來中低壓液相色譜柱主要有進樣系統、輸液系統、分離系統、檢測系統和數據處理系統。
中低壓液相色譜柱的保護:
1、流動相和樣液都需用0.45um孔徑的濾膜過濾。
2、加3~5cm保護柱。
3、進樣閥進樣。
4、用純甲醇保存色譜柱,防止細菌生長。
5、防止過酸或過堿。
6、防止振動和逆向流動。
7、對硅膠基鍵合相,水溶液流動相的ph值不得超出2~8.5的范圍,使用溫度不宜過高。
8、中低壓液相色譜柱在酸性或堿性條件下使用后,應依次用水和甲醇清洗。對暫時不用而需要較長時間保存的色譜柱,要用純甲醇清洗。
9、中低壓液相色譜柱兩端用金屬螺帽封閉,保存在干凈的有機溶劑中。
中低壓液相色譜柱的再生:
一般情況下,硅膠和ods等化學鍵合固定相再生是困難的。有時采用下述方法可能提高柱效。
1、由于雜質微粒等因素,使色譜柱上端固定相變色,柱效下降。這時,可仔細地將變色部分除去約3mm左右,再補充新的固定相。
2、當色譜柱吸附未被洗脫的成分時,柱效將明顯下降,可選擇合適的溶劑洗凈。
3、當采用梯度洗脫時,色譜柱在重復使用前,用泵把幾倍于柱體積的起始溶劑壓經色譜柱,以重新建立起始的平衡來得到再生。